木蝴蝶化学成分分析 本文关键词：化学成分，蝴蝶，分析
木蝴蝶化学成分分析 本文简介：摘要：本实验通过高效液相色谱-二极管阵列-电喷雾质谱联用（HPLC-DAD-ESIMS）技术，对木蝴蝶甲醇提取物主要化学成分进行分析。采用WatersSunFireC18（250mm×4.6mm，5μm）的色谱柱，以柱温40℃，流动相为乙腈-纯水（梯度洗脱），流速为0.5mL/min，进样体积10μ
木蝴蝶化学成分分析 本文内容：
摘要：本实验通过高效液相色谱-二极管阵列-电喷雾质谱联用（HPLC-DAD-ESIMS）技术，对木蝴蝶甲醇提取物主要化学成分进行分析。采用WatersSunFireC18（250mm×4.6mm，5μm）的色谱柱，以柱温40℃，流动相为乙腈-纯水（梯度洗脱），流速为0.5mL/min，进样体积10μL，检测波长为360nm的条件进行样品分析。通过对木蝴蝶甲醇提取物进行分析，共指认8个颇为重要的化学成分，分别是木蝴蝶苷b、2α,3β-二羟基羽扇豆醇、黄芩苷、腺苷、白杨素-7-葡萄糖酸苷、黄芩苷元、羽扇豆醇、白杨黄素。该方法操作简单，分析速度快，可用于对木蝴蝶中化学成分进行鉴定。
关键词：木蝴蝶；化学成分；液相色谱-质谱技术
木蝴蝶，又名千层纸、玉蝴蝶、破故纸等，是一种重要的中药材，对咽痛喉痹、声音嘶哑、咳嗽、肝胃气痛、浸淫疮等症状有显著疗效[1-2]。木蝴蝶化学成分以黄酮及其苷类为主，此外还有挥发油、对羟基苯乙醇和环己醇类、紫碱类、有机酸类化合物等，而黄酮类是其主要活性成分[3-5]。据报道，木蝴蝶的黄酮类成分具有抗炎、抗氧化、降糖、抑制病毒及肿瘤生长等药理作用[6]。木蝴蝶中黄酮种类繁多，准确快速地鉴定其结构对于监控木蝴蝶的质量具有重要意义。本研究对木蝴蝶甲醇提取物中化学成分进行研究，根据相对分子质量、分子碎片峰、紫外吸收光谱等参数，分析了木蝴蝶中已发现和可能存在的化学成分，建立了木蝴蝶中化学成分快速鉴定方法，为其质量评价方法提供依据。
1实验部分
1.1仪器与试剂高效液相色谱仪（2695，Waters，美国）、高效液相色谱-线性离子阱质谱联用仪（LTQ-Fleet，ThermoFisher，美国）、超声清洗仪（BS-250E，中国昆山超声仪器有限公司）、超纯水仪（MicroconYM-100，Millipore，美国）。木蝴蝶药材（购自长春中东大药房）、甲醇（分析纯，北京化工厂）、乙腈（色谱纯，Fisher，美国）、实验用水为经Milli-Q超纯水系统处理后的超纯水。1.2样品提取将干燥的木蝴蝶种子粉碎，精密称取1g粉末，加入25mL甲醇超声提取10min，于4000r/min下离心5min，将上清液转移到50mL容量瓶中，残渣在相同条件下提取一次，合并提取液，用甲醇定容。取1mL该溶液过0.45μm滤膜，待测。1.3液相色谱条件色谱柱为WatersSunFireC18色谱柱（250mm×4.6mm，5μm），柱温：40℃，流动相A为乙腈，流动相B为纯水，流速为0.5mL/min，色谱洗脱梯度见表1，进样量为10μL，检测波长为360nm。1.4质谱条件质谱分析采用电喷雾电离源（ESI），喷雾电压为4.5kV，负离子检测模式，扫描范围为m/z100～1000，鞘气为氮气，流速为20bar，毛细管温度为250℃，毛细管电压为20V。
2结果与讨论
2.1液相色谱条件的优化以超纯水作为水相，分别考察乙腈和甲醇作为有机相的分离效果。发现甲醇和水为流动相时可以达到基线分离，但是色谱峰形较差，并且洗脱时间较长，所以采用乙腈作为有机相。进一步优化洗脱梯度，最终实现了各化合物的有效分离。木蝴蝶提取物的总离子流图见图1。2.2HPLC-DAD-ESI-MS分析木蝴蝶甲醇提取物化合物的保留时间及质谱信息等见表2，紫外吸收光谱图见图2、3。在实验条件下，共从木蝴蝶甲醇提取物中分离得到10个化学成分，总离子流图见图1，可以看见10个化学成分都获得了基线分离。化合物1的保留时间为4.69min，特征离子为593，通过查阅文献证明该化合物为木蝴蝶苷b。光谱实验表明该化合物有2个紫外吸收波长，分别为215nm和273nm，与其化合物的特征吸收一致，进一步证明了这一推论。按照同样的方式，确认化合物3、4、6、7、8、9、10分别为2α,3β-二羟基羽扇豆醇、黄芩苷、腺苷、白杨素-7-葡萄糖酸苷、黄芩苷元、羽扇豆醇、白杨黄素。
3结论
本研究以HPLC-DAD-ESI-MSn技术作为研究手段，探讨了木蝴蝶甲醇提取物主要化学成分的分析方法。该方法采用高效液相色谱法对混合化合物进行分离，采用DAD检测器和电喷雾质谱法对目标成分进行结构确认，通过将所得到的光谱图和质谱数据与文献进行对照，确定了8种化合物的结构，分别为木蝴蝶苷b、2α,3β-二羟基羽扇豆醇、黄芩苷、腺苷、白杨素-7-葡萄糖酸苷、黄芩苷元、羽扇豆醇、白杨黄素。
作者：陈丽娜 杨明 时东方 刘春明 单位：长春师范大学 中心实验室
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